O CE bioquímico rápido do reagente da digestão 5-15 Min Enzyme BsaI do ADN aprovou

Enzimas BsaI

as enzimas são umas séries de enzimas projetadas da limitação para a digestão rápida do ADN em 5-15 enzimas mínimas podem ser usadas para digerir os produtos do plasmídeo, os genomic e os virais do ADN assim como do PCR. Todas as enzimas mostram a atividade superior no amortecedor universal, assim que simplificaram o sistema de reação enzimático da digestão. Além disso, as enzimas fornecem a redundância excelente da enzima, permitindo a digestão fácil de moldes adicionais ou difíceis da carcaça.

Transporte e armazenamento

Os componentes são enviados com bloco de gelo e podem ser armazenados em -20°C por 2 anos.

Cortando o local

5' - GGTCTC (N)1↓-3 '

3' - CCAGAG (N)5↑-5 '

Condições recomendadas da reação

Amortecedor de 1× FuniCut™; Incube em 37℃.

Inativação térmica

Incubação em 80℃ para 20 mínimos.

Controle da qualidade

1. Definição da atividade: 1 ADN do μg pPIC9K foi digerido completamente com 1 μL da enzima no minuto 15 em 37℃ em um volume total da reação do μL 20.

2. Ensaio prolongado da atividade da incubação/estrela: Nenhuma degradação detectável de 1 ADN do μg pPIC9K devido à contaminação da nuclease ou à atividade da estrela ocorreu durante a incubação com 1 μL de FuniCut™ BsaI para 3 horas em 37℃. Uma incubação mais longa pode conduzir à atividade da estrela.

3. Ligadura e Recleavage (L/R) ensaio: Após digerido com a enzima 1μL sob a circunstância ótima, recicle o produto da digestão pode ser ligado sob a ligase do ADN T4 em 22℃. O produto da ligadura pode ser recleavaged pela enzima.

4. Atividade não específica do Endonuclease: A incubação de 1 enzima do μL com 1 ADN supercoiled μg do plasmídeo por 4 horas em 37℃ conduziu a nenhuma mudança da condição supercoiled.

Instruções

1. Protocolo para a digestão rápida do ADN diferente

1,1 liga que os seguintes componentes da reação no gelo na ordem indicaram:

[Nota]: produtos refinados *For do PCR. Uma quantidade de amortecedor de 10× FuniCut™ pode ser reduzida ao μL 2 devido à concentração iônica restante nos produtos unpurified do PCR. O produto do PCR foi recomendado ser digestão prévia refinada quando o produto do PCR será usado clonando.

1,2 mistura delicadamente (para fazer não o redemoinho) e rotação para baixo.

1,3 incube em 37℃ para o minuto 15 (ADN do plasmídeo) ou para o minuto 15-30 (produto do PCR) ou para o minuto 30-60 (ADN genomic).

1,4 opcional: Neutralizar a enzima aquecendo para o minuto 20 em 80℃.

2. Digestão dobro e múltipla do ADN

2,1 use 1 μL de cada enzima e escale acima as condições da reação apropriadamente.

2,2 o volume combinado das enzimas na mistura de reação não deve exceder 1/10 do volume total da reação.

2,3 se as enzimas exigem temperaturas diferentes da reação, o começo com a enzima que exige uma temperatura mais baixa, a seguir adiciona a segunda enzima e incuba-a na temperatura mais alta.

3. Escamação acima da reação da digestão do ADN do plasmídeo

[Nota]: Incubação em um termostato da água, no termostato do metal ou no termostato da areia. Aumente o tempo da incubação se o volume total da reação excede o μL 20.

Número de locais de reconhecimento no ADN